PEI 40K reagens za transfekciju

PEI 40K transfekcijski reagens (linearizirani polietileniminski transfekcijski reagens) visoko je nabijen kationski polimer s molekularnom težinom od 40,000 koji se temelji na lineariziranom polietileniminu, koji je pozitivno nabijen i može učinkovito vezati negativno nabijene nukleinske kiseline u obliku kompleksa s ih i uvesti u stanice, a pogodan je za transfekciju plazmidne DNA u stanice. PEI 40K (linearizirani polietilenimin) transfekcijski reagens ima nisku citotoksičnost, visoku učinkovitost transfekcije i nisku cijenu, što ga čini vrlo isplativim u usporedbi s transfekcijskim reagensima na bazi liposoma. Potvrđeno je da se linearni PEI 40K reagens za transfekciju naširoko koristi u raznim staničnim linijama uključujući HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/ 3T3, Sf9, HepG2 i Hela stanice, itd., s učinkovitošću transfekcije od čak 80%~90%. Koncentracija PEI 40K, glavne komponente ovog proizvoda, je 1 mg/mL.

Brod s mokrim ledom; Čuvati na -20 stupnjeva, vrijedi 6 mjeseci. Ili čuvajte na 4 stupnja, vrijedi 3 mjeseca.

1. Priprema prije transfekcije adherentnih stanica (6-ploča s jažicama, referentna tablica za druge specifikacije):

A) Dan prije transfekcije, stanice su bile prikladne za ravnomjerno nasađivanje u ploče s porama na an

odgovarajuća gustoća za konvergaciju na 70 – 85% nakon formalne transfekcije;

B) Prije transfekcije, primarni stanični medij je uklonjen i ispran 1-2 puta s PBS-om prije zamjene s 1,8 mL baznog medija bez seruma ili niske razine seruma (ispod 5%), ili Opti-MEM-a; različite stanice imale su različitu ovisnost o serumu ovisno o specifičnom tipu stanice;

C) Nanesene stanice stavljene su u inkubator i započela je priprema transfekcijskih kompleksa.

2. Prije transfekcije pripremljene su suspenzije stanica:

A) Na dan transfekcije odgovarajuća količina stanica je centrifugirana da se ukloni medij

i resuspendiran s bazalnim medijem bez seruma ili s niskim sadržajem seruma (ispod 5%);

B) Pripremljene suspenzije stanica stavljene su u inkubator i započela je priprema

transfekcijskih kompleksa, a omjer volumena između transfekcijskih kompleksa i medija mogao bi

napraviti u odnosu na prianjajuće stanice za odgovarajuće prilagodbe.

3. Transfekcijski kompleksi su pripremljeni:

A) Tekućina za pripremu A: 100 μL baznog medija bez seruma i 2 ug plazmidne DNA, upuhivanje i

mješoviti;

B) Priprema tekućine B: 100 L baznog medija bez seruma i 6-8 μL PEI 40 K Transfekcija

Reagens, puhanje i miješanje;

C) Otopina B dodana je tekućini A, lagano propuhana i promiješana, te inkubirana na sobnoj temperaturi

15 min da se formira DNA-PEI transfekcijski kompleks.

4. Transficirane stanice:

A) Dodajte transfekcijski kompleks dobiven u prethodnom koraku na prethodno promijenjenu ploču s rupama pomoću

križanje ili okruživanje otopine;

B) Protresite ploču "8" ili na drugi način da se potpuno promiješa i inkubira u inkubatoru na 37 stupnjeva, 5% CO2;

C) DNA-PEI transfekcijski kompleksi sa stanicama tijekom 4 – 6 h pokazali su bolju učinkovitost transfekcije,

odgovarajuće produženje ili inkubacija preko noći i bolja učinkovitost transfekcije.

1. Molimo koristite zdrave stanice u dobrom stanju, a oporavljene stanice preporučuje se pasažom najmanje 2 puta prije transfekcije.

2. Molimo koristite visokokvalitetnu plazmidnu DNK bez endotoksina.

3. Za početnu upotrebu, preporučuje se da se proizvod dozira kako bi se izbjeglo ponovno zamrzavanje i odmrzavanje.

4. Visoke koncentracije seruma pri transfekciji, kao i uporaba antibiotika, mogu utjecati na status stanice kao i na učinkovitost transfekcije.

5. Različita stanična tolerancija, osjetljivost, duljina vremena inkubacije transfekcije i omjer upotrebe PEI/DNA prilagođeni su prema potrebi.

6. Molimo nosite eksperimentalna odijela i jednokratne rukavice tijekom rada.

Raspored: Upotreba transfekcije u različitim spremnicima stanične kulture (samo za referencu)

Samo za istraživačku upotrebu!

Popularni tagovi: pei 40k transfekcijski reagens, Kina pei 40k transfekcijski reagens proizvođači, dobavljači, tvornica