Kompleti za bojenje po Gramu

Bojanje po Gramu je metoda diferencijalnog bojenja koja se široko koristi u mikrobiologiji, a koja se može koristiti za razlikovanje Gram-pozitivnih bakterija (G+) od Gram-negativnih bakterija (G-). Osnovno načelo temelji se na različitim kemijskim komponentama staničnih stijenki bakterija. Nakon primarnog bojenja kristalno ljubičastom i jedkom joda, bakterije stvaraju u vodi netopljive kristalno violet-jodne komplekse u staničnoj stijenci. Gram-pozitivne bakterije imaju debele stanične stijenke, ne sadrže lipide, bogate su peptidoglikanom i umrežene su tako da tvore gustu rešetkastu strukturu. Kada se tretira etanolom, peptidoglikanska mreža se skuplja, što može blokirati kristalno ljubičasto-jodni kompleks. Ostaje u staničnoj stijenci, dajući joj ljubičastu boju kristalno ljubičaste. Gram-negativne bakterije, s druge strane, imaju tanke stanične stijenke, nizak sadržaj peptidoglikana i labavo umrežavanje. Kada je izložena etanolu, vanjska membrana bogata lipidima se otapa, u staničnoj stijenci se pojavljuje velika praznina, a kristalno ljubičasto-jodni kompleks istječe, tako da stanice postaju bezbojne nakon dekolorizacije etanolom. U ovoj će se točki kontrastnim bojanjem safraninom Gram-negativne bakterije obojiti crveno.

Otopina za bojenje po Gramu sadrži četiri komponente, odnosno kristalno ljubičastu otopinu za bojenje amonijevog oksalata, 1% otopinu joda, otopinu za odbojavanje i otopinu za bojenje fuksina. Nakon bojenja gram-pozitivne bakterije izgledaju ljubičaste do plavo-ljubičaste, a gram-negativne bakterije crvene.

Čuvati i transportirati na sobnoj temperaturi; vrijedi 12 mjeseci.

1. Parafinski dio deparafinizirajte u vodu; osušite bakterijski bris na prirodan način ili ga zagrijte alkoholnom lampom da se osuši i učvrsti.

2. Početno bojenje: Dodajte kristalno ljubičastu otopinu za bojenje kap po kap da prekrijete uzorak 10-30 s, isperite vodom i osušite centrifugom.

3. Bojanje mrlicom: kap po kap dodajte 1% otopinu joda da pokrijete uzorak 1-1.5 min, isperite vodom i osušite centrifugom.

4. Dekolorizacija: kap po kap dodajte otopinu za dekolorizaciju kako biste isprali tkivo s jednog kraja stakalca radi dekolorizacije, sve dok otopina za dekolorizaciju koja teče više ne bude ljubičasta, a zatim odmah isperite vodom kako biste uklonili otopinu za dekolorizaciju. Pazite da kontrolirate vrijeme odbojavanja.

5. Suprotno bojenje: kap po kap dodajte otopinu za bojenje Fuchsinom 20-60 s, zatim isperite vodom. Obrišite rubove filter papirom.

6. Bakterijski razmazi mogu se promatrati izravno mikroskopom. Nakon sušenja na 60 stupnjeva, dijelovi tkiva su brzo dehidrirani u apsolutnom etanolu tri puta, 1 s, 3 s, odnosno 5 s. Zatim je prozirna ksilenom tijekom 5 minuta i konačno zapečaćena neutralnom gumom za mikroskopsko ispitivanje.

1. Zategnite čep na vrijeme nakon upotrebe reagensa kako biste spriječili isparavanje otapala.

2. Bakterijski razmaz je predebeo, vrijeme kristalno ljubičastog bojenja je predugo, a obezbojenje je nedovoljno, što može dovesti do lažno pozitivnih rezultata. Preporuča se napraviti i negativne i pozitivne bakterijske kontrolne skupine.

3. Svaki set otopine za bojenje može se koristiti za bojanje približno 30 sekcija (bojanje kapanjem).

4. Molimo nosite laboratorijsku kutu i jednokratne rukavice tijekom rada.

Samo za istraživačku upotrebu!

Popularni tagovi: setovi za bojenje po gramu, Kina proizvođači, dobavljači, tvornica pribora za bojenje po gramu