T7 High Yield Transkripcijski komplet

 

Naziv proizvoda	Kat.br.	spec.
T7 High Yield Transkripcijski komplet	G3021-50T	50 T

 

 

T7 High Yield Transcription Kit kompletan je sustav za učinkovitu sintezu RNK za blot in situ hibridizacijske sonde, testove zaštite ribonukleaze, posttranskripcijske modifikacije uključujući spajanje RNK i poliadenilaciju, te za in vitro translaciju. T7 RNA polimeraza vrlo je specifična za vlastiti promotor i prepisat će velike količine RNA iz sekvenci DNA (na primjer, plazmida, fragmenata lančane reakcije polimeraze (PCR) ili sintetičke DNA) nizvodno od svog promotora,

U reakcijskom sustavu, 1 ug uzorka može proizvesti više od 100 ug RNA, što je prikladno za pripremu različitih duljina RNA.

 

 

 

Brod s mokrim ledom; Čuvati na -20 stupnjeva, vrijedi 12 mjeseci.

 

 

Broj komponente	komponenta	G3021-50T
G3021-1	Mješavina enzima za transkripciju T7 RNA	200 μL
G3021-2	5×T7 transkripcijski reakcijski međuspremnik	250 μL
G3021-3	25 mM NTP mješavina	100 μL
G3021-4	DNaza I	50 μL
G3021-5	Voda bez nukleaza	1 mL
G3021-6	Kontrolni obrazac (0,5 ug/μL)	10 μL
Priručnik		Jedan primjerak

 

 

1. Priprema za predložak:

a. Plazmid koji sadrži promotor T7: da bi se dobila RNA određene duljine, plazmid treba biti potpuno lineariziran i pročišćen kao predložak. Linealizacija plazmida s restrikcijskim enzimom trebala bi proizvesti 5' prepust ili tupi kraj (izbjegavajte 3' stršeći kraj). Preporučena količina šablona po reakciji je ~1 ug;

b. PCR produkt ili sintetička DNA: 5' kraj početnice nekodirajućeg lanca fuzioniran sa sekvencom iz T7 promotora (5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3') izvodi PCR pojačanje.. PCR produkti mogu biti izravno korišteni kao predlošci za transkripciju bez pročišćavanja, ali će se prinos RNK povećati nakon pročišćavanja. Preporučena količina predloška po reakciji je ~0.5 ug.

2. In vitro reakcija translacije:

a. Dodajte sljedeću komponentu u sterilnu epruvetu bez nukleaza na ledu navedenim redoslijedom

b. Lagano promiješajte i kratko centrifugirajte.

c. Inkubirajte na 37 stupnjeva 2 h. (Prilagodite vrijeme reakcije ovisno o ciljnoj duljini i željenom prinosu RNA. Na primjer, RNA manja od 300 nt, preporučuje se inkubacija 4 sata ili dulje).

komponenta	Iznositi	Konačna konc.
Predložak	0.5-1 ug	25-50 µg/mL
5×T7 transkripcijski reakcijski međuspremnik	4 μL	1×
25 mM NTP mješavina	2 μL	2,5 mM
Mješavina enzima za transkripciju T7 RNA	4 μL
Voda bez nukleaza	Do 20 μL	--

3. Liječenje DNazom I

Nakon reakcije dodajte 1 μL DNaze I, kratko promiješajte i inkubirajte na 37 stupnjeva 15 minuta.

4. Kvantifikacija produkata transkripcije

a. Analiza gel elektroforezom

Preporučuje se 1% denaturirajući formaldehid agarozni gel.

b. Metoda UV apsorpcije

Koncentracija RNA proizvoda određena opremom za UV apsorpciju nakon pročišćavanja (slobodni nukleotidi utjecat će na točnost kvantifikacije).

 

 

1. Nosite odgovarajuće rukavice i maske i koristite potrošni materijal za jednokratnu upotrebu bez RNaze kako biste spriječili kontaminaciju RNazom.

2. Za pripremu označene RNA, zamijenite NTP mješavinu u kompletu s odgovarajućim reagensom.

3. Duljina transkripcije kontrolnog predloška u kompletu bila je 500 nt.

4. Radi vaše sigurnosti i zdravlja nosite zaštitne naočale, rukavice ili zaštitnu odjeću.

 

Samo za istraživačku upotrebu!

 

 

Popularni tagovi: t7 visokoučinkoviti transkripcijski komplet, Kina t7 visokoučinkoviti transkripcijski komplet proizvođači, dobavljači, tvornica