Kit za ekstrakciju DNA/RNA virusa

 

Naziv proizvoda	Kat.br.	spec.
Kit za ekstrakciju DNA/RNA virusa	G3647-50T	50T

 

 

Komplet je dizajniran za brzu izolaciju različitih virusnih DNA/RNA iz seruma, plazme, urina, supernatanta medija stanične kulture, temeljnog virusa i zaraženih tkiva. Korištenjem karakteristika stupca za adsorpciju nukleinske kiseline koji se reverzibilno veže na nukleinsku kiselinu, zajedno s posebnim puferskim sustavom, nukleinskoj kiselini je dopušteno da se specifično veže na membranski matriks, a proteini, stanični fragmenti i drugi zagađivači se učinkovito ispiru, i na kraju se nukleinska kiselina eluira iz adsorpcijske kolone s vodom bez nukleaze. Dobivena visokokvalitetna DNA/RNA može se izravno koristiti u nizvodnoj PCR, sintezi cDNA, RT-qPCR i drugim eksperimentima molekularne biologije.

 

 

Proteinaza K i nositelj RNA otpremljeni s mokrim ledom i pohranjeni na -20 stupnjeva. Ostali reagensi su otpremljeni i pohranjeni na sobnoj temperaturi; vrijedi do 1 godine.

 

 

Broj komponente	komponenta	G3647-50T
G3647-1	MeđuspremnikVLB	10 mL
G3647-2	Proteinaza K	1 mL
G3647-3	RNA nosač	150 μL
G3647-4	MeđuspremnikVWA	12 mL
G3647-5	Međuspremnik VWB	15 mL
G3647-6	Voda bez nukleaza	12 mL
G3647-7	Okretne kolone s epruvetama za sakupljanje	50
Priručnik		Jedan primjerak

 

 

1. Ako se BufferVLB i BufferVWA taloži, zagrijte ih na 37 stupnjeva i upotrijebite kada se vrati na sobnu temperaturu.

2. Prije prve uporabe dodajte 18 mL bezvodnog etanola u BufferVWA i 60 mL bezvodnog etanola u BufferVWB.

3. Nosač RNA može se dodatno zapakirati i pohraniti na -20 stupnjeva prije prve upotrebe, a ponovno zamrzavanje i odmrzavanje treba izbjegavati.

4. Prethodno ohladite mlin ako brusite maramicu pomoću mlina.

 

 

1. Priprema uzoraka:

a. Liza seruma, plazme, urina, supernatanta medija stanične kulture i temeljnog virusa: Uzorkovanje 10-200 μL seruma, plazme, urina, supernatanta stanične kulture ili temeljnog virusa. Početna količina manja od 200 μL može se nadopuniti do 200 μL s PBS-om ili vodom bez nukleaze.

b. Liza zaraženog tkiva: Stavite 10~20 mg svježih ili kriokonzerviranih zaraženih tkiva u epruvetu za centrifugiranje bez nukleaze od 1,5 mL koja sadrži 2~3 zrnca od 3 mm (preporučuje se G0203) ili koristite posebne epruvete za mljevenje (preporučuje se HT-200- M). Odmah stavite epruvetu centrifuge ili epruvetu za mljevenje koja sadrži tkivo u tekući dušik, a zatim temeljito sameljite tkivo da se homogenizira na niskoj temperaturi pomoću mlina za tkivo (preporučuje se KZ-5F-3D, ako je tkivo nisu temeljito homogenizirani, to će utjecati na prinos i kvalitetu DNA/RNA). Dodajte 200 μL PBS-a ili vode bez nukleaze nakon mljevenja.

2. Dodajte 200 μL pufera VLB, 20 μL proteinaze K i 3 μL nosača RNA. Nakon temeljitog miješanja, inkubirajte na 56 stupnjeva 10 minuta.

3. Dodajte 200 μL bezvodnog etanola, promiješajte naopako.

4. Prenesite otopinu iz prethodnog koraka u kolonu centrifuge, centrifugirajte na 12,000 okretaja u minuti 1 minutu i bacite filtrat iz epruvete za sakupljanje.

5. Dodajte 500 μL pufera VWA u kolonu za centrifugiranje, centrifugirajte na 12,000 okretaja u minuti 1 minutu i odbacite filtrat iz epruvete za sakupljanje.

6. Dodajte 700 μL pufera VWB u kolonu za centrifugiranje (dodajte pufer VWB uz stijenku cijevi kolone za centrifugiranje kako biste pomogli pri ispiranju zaostale soli na stijenci cijevi). centrifugirajte na 12,000 okretaja u minuti 30 s i bacite filtrat.

7. Ponovite korak 6.

8. Stavite Spin kolonu na epruvetu za sakupljanje, centrifugirajte na 12,000 okretaja u minuti 2 minute.

9. Premjestite kolonu za centrifugiranje u novu epruvetu za centrifugiranje bez nukleaze od 1,5 mL, otvorite poklopac 3~5 minuta na sobnoj temperaturi, tako da zaostali etanol iz kolone za centrifugiranje može potpuno ispariti.

10. Dodajte 30~50 μL vode bez nukleaze u centrifugalnu epruvetu, ostavite na sobnoj temperaturi 5 minuta, centrifugirajte na 12,000 okretaja u minuti 2 minute na sobnoj temperaturi da prikupite otopinu RNA. Da biste dobili veću koncentraciju RNK, možete također dodati prvi eluent natrag u kolonu za centrifugiranje RNK, zatim stajati na sobnoj temperaturi 5 minuta i centrifugirati 2 minute da ponovno sakupite RNK.

 

 

1. Pažljivo pročitajte priručnik proizvoda prije uporabe.

2. Zbog dodavanja RNK nosača u procesu ekstrakcije, količina se ne može odrediti elektroforezom ili apsorptometrom.

3. Prijenosna RNA koju pruža ovaj komplet je RNA iz E. coli, koja uglavnom služi za poboljšanje učinkovitosti oporavka nukleinske kiseline u tragovima i sprječavanje razgradnje RNA u tragovima. Ako PCR početnice imaju visoku homologiju s nosačem RNA, početnice se mogu redizajnirati.

4. Prije eluiranja, etanol treba potpuno ispariti kako bi se izbjegao utjecaj zaostalog etanola na daljnje eksperimente.

5. Ne sušite dugo, kako ne biste utjecali na učinkovitost elucije nukleinske kiseline.

6. Radi vaše sigurnosti i zdravlja nosite laboratorijsku kutu i jednokratne rukavice.

 

Samo za istraživačku upotrebu!

 

 

Popularni tagovi: komplet za ekstrakciju DNK/RNK virusa, Kina pribor za ekstrakciju DNK/RNA virusa proizvođači, dobavljači, tvornica