MagBind set za ekstrakciju genomske DNK biljke

Upotrebom superparamagnetskih magnetskih kuglica posebno razvijenih za ekstrakciju i pročišćavanje nukleinske kiseline i posebno optimiziranog puferskog sustava za lizu, ovaj komplet može sigurno, brzo i učinkovito ekstrahirati genomsku DNK visoke čistoće iz 50-100 mg uzoraka biljnog tkiva (kao što su pšenica, lišće kukuruza, itd). Biljno tkivo može brzo otpustiti genomsku DNA nakon lize i učinkovito ukloniti nečistoće osim nukleinske kiseline u uzorku. Ovaj pribor ne zahtijeva fenol, kloroform i druge organske reagense i ne zahtijeva centrifugiranje u više koraka. Ekstrahirana genomska DNA može se koristiti u naknadnoj PCR reakciji, reakciji probave enzima, Southern hibridizaciji, RAPD, AFLP, RFLP i mnogim konvencionalnim eksperimentima molekularne biologije.

RNaza A otprema se s mokrim ledom i pohranjuje na -20 stupnjeva; Preostali reagensi se otpremaju i čuvaju na sobnoj temperaturi; Rok trajanja je 12 mjeseci.

Prije početka (molimo pažljivo pročitajte)

1. Ako se pufer PGL1 taloži, zagrijte ga na 65 stupnjeva i upotrijebite kada se vrati na sobnu temperaturu.

2. Prije upotrebe dodajte 24 mL bezvodnog etanola u pufer GD i 56 mL bezvodnog etanola u pufer PW, dobro promiješajte i upotrijebite.

3. Vlasnički magnetni stalak.

1. Liza uzoraka biljnog tkiva:

a. Krekiranje mljevenja lizata + mlina: (preporučeno) Dodajte 50{{10}} μL pufera PGL1 u epruvetu za mljevenje od 2,0 mL bez nukleaze (preporučeno HT-200-M) unaprijed , a zatim dodajte perle od nehrđajućeg čelika 3-4 4 mm (preporučeno G0104-200G). Zatim brzo prenesite 50-100 mg svježeg ili kriokonzerviranog biljnog tkiva u epruvetu za mljevenje (uzorci listova su izrezani na 0,5 cm2, korijenje i stabljike su izrezani na 0,5 cm). Stavite cijev za mljevenje na mlin (preporučeno KZ-5F-3D) i sameljite (preporučeni postupak mljevenja: postavite frekvenciju na 70 HZ, svaki put meljite 30 sekundi, ponavljajući postupak {{19 }} puta s intervalom od 5 sekundi između svakog mljevenja. Ako je uzorak teško samljeti, poput korijenja i stabljika, možete povećati vremena mljevenja 30 ili više) dok se mljevenje ne homogenizira (ako tkivo nije temeljito homogenizirano, to će utjecati na prinos i kvalitetu DNA). Nakon potpunog mljevenja dodajte 20 μL RNaze A u epruvetu za mljevenje, pomiješajte naopako i inkubirajte na 65 stupnjeva 15 minuta, miješajući naopako svakih 5 minuta.

b. Tekući dušik + Pucanje mljevenjem u mlinu: brzo prenesite 50-100 mg svježeg ili kriokonzerviranog biljnog tkiva u 2.0 mL epruvetu za mljevenje bez nukleaze (preporučeno HT-200-M, uzorci lišća se režu na 0.5 cm2, korijenje i stabljike se režu na 0.5 cm) koji sadrži 3~4 3 mm cirkonijeve kuglice (preporučeno G0203-150G) i prethodno ohlađene tekućim dušikom. Stavite cijev za mljevenje na mlin (preporučuje se KZ-5F-3D) (brzo prethodno ohladite adapter u tekućem dušiku prije postavljanja cijevi za mljevenje) i meljite dok se potpuno ne usitni (ako tkivo nije potpuno samljeven u prah, to će utjecati na prinos i kvalitetu DNK). Zatim dodajte 500 μL pufera PGL1 i dobro promiješajte, dodajte 20 μL RNaze A u epruvetu za mljevenje, pomiješajte naopako i inkubirajte na 65 stupnjeva 15 minuta, miješajući naopako svakih 5 minuta.

c. Tekući dušik + pucanje žbuke mljevenjem: Brzo prenesite 50-100 mg svježeg ili kriokonzerviranog biljnog tkiva u žbuku prethodno ohlađenu tekućim dušikom (uzorci lišća se režu na 0,5 cm2, korijenje i stabljike se režu na 0.5 cm). Dodajte tekući dušik i usitnite tkivo tučkom, kontinuirano dodavajući tekući dušik dok se potpuno ne usitni (ako tkivo nije potpuno samljeveno u prah, to će utjecati na prinos i kvalitetu DNK). Zatim premjestite praškaste uzorke u epruvetu za centrifugu bez nukleaze od 1,5 mL koja sadrži 500 μL pufera PGL1 i dobro promiješajte. I dodajte 20 μL RNaze A u epruvetu centrifuge, pomiješajte naopako i inkubirajte na 65 stupnjeva 15 minuta, miješajući naopako svakih 5 minuta.

d. Tekući dušik + štapić tučkom Pucanje mljevenjem: Brzo prenesite 50-100 mg svježeg ili kriokonzerviranog biljnog tkiva u epruvetu za centrifugu bez nukleaze od 1,5 mL prethodno ohlađenu tekućim dušikom (uzorci listova izrezani su na 0,5 cm2 , korijenje i stabljike režu na 0.5 cm). Dodati tekući dušik i samljeti tkivo tučkom, kontinuirano dodavajući tekući dušik dok se potpuno ne usitni (ako tkivo nije potpuno samljeveno u prah, to će utjecati na prinos i kvalitetu DNK). Zatim dodajte 500 μL pufera PGL1 u epruvetu centrifuge i dobro promiješajte. I dodajte 20 μL RNaze A u epruvetu centrifuge, pomiješajte naopako i inkubirajte na 65 stupnjeva 15 minuta, miješajući naopako svakih 5 minuta.

2. Dodajte 100 μL pufera PGL2 u epruvetu centrifuge, dobro promiješajte i stavite na led 5 minuta.

3. Centrifugirajte na 12,000 okretaja u minuti 5 minuta na 4 stupnja, premjestite supernatant u novu epruvetu za centrifugiranje od 2.0 mL bez nukleaze (ako u dobivenom supernatantu još ima plutajuće tvari, potrebno je ponovno centrifugirati na 12,000 okretaja u minuti 5 min na 4 stupnja i prebaciti supernatant u drugi novi 2.0 mL Epruveta za centrifugiranje bez nukleaze, napomena: dobiveni supernatant ne smije premašiti 500 μL).

4. Dodajte pufer GB iste količine tekućeg volumena supernatanta u supernatant iz prethodnog koraka, potpuno okrenut naopačke i dobro promiješajte.

5. Dodajte isti volumen izopropanola u smjesu iz prethodnog koraka, skroz naopako i dobro promiješajte. Zatim dodajte 40 μL SweMag kuglica (SweMag kuglice treba ravnomjerno raspršiti prije upotrebe) i dobro promiješajte pipetom ili vorteks oscilacijom.

6. Ostavite na sobnoj temperaturi 10 minuta, a tijekom postupka postavljanja, koristite pipetu za puhanje ili vrtloženje za miješanje nekoliko puta kako bi SweMag kuglice ostale u suspenziji.

7. Prebacite epruvetu centrifuge na magnetski stalak i ostavite da stoji 30 s. Kada je supernatant bistar, aspirirajte i bacite supernatant.

8. Dodajte 600 μL pufera GD, uklonite magnetski stalak, ispuhajte pipetom ili vrtložite dok se SweMag kuglice dobro ne rasprše. Premjestite epruvetu centrifuge na magnetski stalak i ostavite da stoji 30 s. Kada je supernatant bistar, aspirirajte i bacite supernatant.

9. Dodajte 700 μL pufera PW, uklonite magnetski stalak, ispuhajte pipetom ili miješajte dok se SweMag kuglice dobro ne rasprše. Premjestite epruvetu centrifuge na magnetski stalak i ostavite da stoji 30 s. Kada je supernatant bistar, aspirirajte i bacite supernatant.

10. Ponovite korak 9.

11. Otvorite čep epruvete za centrifugiranje i ostavite na sobnoj temperaturi 5-10 min, tako da zaostali etanol može potpuno ispariti (izbjegavajte pretjerano sušenje SweMag kuglica, što može utjecati na prinos nukleinske kiseline).

12. Uklonite magnetski stalak, dodajte 80-100 μL pufera TE ili vode bez nukleaze u epruvetu za centrifugu, upotrijebite pipetu za lagano puhanje ili vrtloženje dok se SweMag kuglice dobro ne rasprše. Ostavite na sobnoj temperaturi 5 min.

13. Premjestite epruvetu za centrifugu na magnetski stalak dok se SweMag kuglice u potpunosti ne apsorbiraju i upiju supernatant u novu epruvetu za centrifugu od 1,5 mL bez nukleaze kako biste dobili DNK visoke čistoće.

1. Prije uporabe pažljivo pročitajte priručnik proizvoda.

2. Pokušajte koristiti svježe biljno tkivo kako biste osigurali prinos i cjelovitost genomske DNA.

3. Kriokonzervirani biljni uzorci trebali bi izbjegavati opetovano zamrzavanje i odmrzavanje, inače će kvaliteta i prinos ekstrahirane DNK biti smanjeni.

4. Za biljna tkiva s visokim sadržajem nukleinske kiseline, početna količina uzoraka biljnog tkiva može se na odgovarajući način smanjiti kako bi se potpuno liziralo; za uzorke s niskim sadržajem nukleinske kiseline, početna količina uzoraka biljnog tkiva može se odgovarajuće povećati kako bi se dobila veća koncentracija genomske DNA.

5. Izbjegavajte smrzavanje suspenzija magnetskih kuglica tijekom skladištenja. Magnetske kuglice se lako talože i prije upotrebe ih treba potpuno promiješati kako bi ostale u jednoličnoj suspenziji.

6. Prije dodavanja magnetskih kuglica u uzorak, reagense u uzorku je potrebno dobro promiješati.

7. Etanol treba potpuno ispariti prije eluiranja DNK kako bi se izbjegao utjecaj rezidualnog etanola na daljnje eksperimente.

8. Ne sušite magnetske kuglice dulje vrijeme kako biste izbjegli utjecaj na učinkovitost eluiranja DNA.

Raspored

Prinos genomske DNA ekstrahiran iz mnogih jednostavnih biljnih uzoraka pomoću ovog pribora prikazan je u tablici ispod. Prinos genomske DNA povezan je s biljnom vrstom, organima i statusom rasta. Sljedeća tablica služi samo kao referenca.

Samo za istraživačku upotrebu!

Popularni tagovi: komplet za ekstrakciju genomske DNK magbind biljke, Kina Komplet za ekstrakciju genomske DNK magbind biljke proizvođači, dobavljači, tvornica