SweScript RT I First Strand CDNA Synthesis Kit (s GDNA Remover)

 

Naziv proizvoda	Mačka. Ne.	spec.
SweScript RT I First Strand cDNA Synthesis Kit (S gDNA Remover)	G3331-50	50 rxns
	G3331-100	100 rxns

 

 

SweScript RT I First Strand cDNA Synthesis Kit kompletan je sustav za učinkovitu sintezu prvog lanca cDNA iz mRNA ili ukupnih RNA šablona. Sadrži sve komponente potrebne za sintezu 1. lanca cDNA i nudi dvije vrste početnica za sintezu cDNA radi vaše udobnosti: Random Hexamer Primer i Oligo (dT)18 Primer. Prvi lanac cDNA sintetiziran ovim sustavom može se izravno koristiti kao predložak u naknadnoj PCR ili PCR u stvarnom vremenu. SweScript RT I (reverzna transkriptaza) je mutirana reverzna transkriptaza koja se temelji na M-MLV reverznoj transkriptazi i dobivena in vitro evolucijskim pregledom. SweScript RT I nema aktivnost RNaze H, čime se izbjegava degradacija RNK u DNA/RNA hibridnom šablonu tijekom reakcije sinteze prvog lanca cDNA. SweScript RT I nema aktivnost RNaze H, izbjegavajući degradaciju RNA u reakciji sinteze prvog lanca cDNA hibrida DNA/RNA, čime se osigurava količina i duljina sinteze prvog lanca cDNA. U usporedbi s divljim tipom enzima, SweScript RT I dramatično je poboljšao toplinsku stabilnost i učinkovitost sinteze, te može učinkovito sintetizirati cDNA u rasponu od 42-55 stupnjeva, kao i cDNA do 10 kb duljine.

 

GDNA Remover također je dostupan u ovom kompletu, koji može brzo ukloniti zaostalu genomsku DNA kontaminaciju iz RNA preparata. Poboljšava autentičnost i ponovljivost eksperimentalnih rezultata i pojednostavljuje dizajn qPCR početnica bez potrebe za dizajniranjem početnica preko egzona.

 

 

Brod s mokrim ledom; Čuvati na -20 stupnjeva, vrijedi 12 mjeseci.

 

 

Broj komponente	komponenta	G3331-50	G3331-100
G3331-1	SweScript RT I enzimska mješavina	50 μL	100 μL
G3331-2	5×reakcijski pufer	200 μL	400 μL
G3331-3	Oligo (dT)18 primer (100 μM)	50 μL	100 μL
G3331-4	Nasumični heksamer primer (100 μM)	50 μL	100 μL
G3331-5	gDNA Odstranjivač	50 μL	100 μL
G3331-6	10 × pufer za uklanjanje gDNA	50 μL	100 μL
G3331-7	Voda bez nukleaza	1 mL	1 mL
Priručnik		Jedan primjerak	Jedan primjerak

a: s inhibitorom RNaze.

b: s dNTP mješavinom i Mg²+.

 

 

1. Uklanjanje genomske DNA

(1) Predložak RNA, voda bez nukleaze, stavljena je na led da se otopi i ostavljena sa strane.

(2) Reakcija uklanjanja genoma (preporučuje se reakcijski sustav od 10 μL):

 

komponenta	Volumen
10 × pufer za uklanjanje gDNA	1 μL
gDNA Odstranjivač	1 μL
Ukupna RNA/ mRNA	0.1 ng-5 ug / 10 pg-0.5 ug
Voda bez nukleaza	Dodati u 10 μL

(3) Lagano promiješajte i kratko centrifugirajte;

(4) Inkubirajte na 37 stupnjeva 2 minute i zatim stavite na led;

2. Sinteza prvog lanca cDNA

(1) Pripremljen je reakcijski sustav obrnute transkripcije (preporučuje se reakcijski sustav od 20 μL)

komponenta	Volumen
Otopina reakcije uklanjanja genoma u prethodnom koraku	10 μL
5×reakcijski pufer	4 μL
Oligo (dT)18 Primer (100 μM)	1 μL
ili Random Hexamer Primer (100 μM)	ili 1 μL
ili genski specifični primer (2 μM)	ili 1 μL
SweScript RT I mješavina enzima	1 μL
Voda bez nukleaza	Dodati u 20 μL

Napomena: Za visoke GC ili složene predloške, predloške RNA, početnice za obrnutu transkripciju, vodu bez nukleaze mogu se prethodno pomiješati. Zagrijte mješavinu RNA-primera na 65 stupnjeva 5 minuta, kratko zavrtite i smjesta stavite na led.

(6) Nježno promiješajte i kratko centrifugirajte.

(7) Izvršite obrnutu transkripciju koristeći dolje preporučene toplinske uvjete:

Temperatura	Vrijeme
25 stupnjeva a	5 min
50 stupnjeva b	15-30 min
85 stupnjeva	5 sek

a: Na primjer, ako koristite Random Hexamer Primer, inkubirajte na 25 stupnjeva 5 minuta, a zatim izvedite sljedeći korak. Ako odlučite koristiti Oligo (dT)18 Primer ili Gene Specific Primer, izravno inkubirajte na 50 stupnjeva.

b: Za GC bogate ili složene predloške, temperatura obrnute transkripcije može se poboljšati na 55 stupnjeva.

 

 

1. Prilikom rukovanja nosite rukavice za jednokratnu upotrebu kako biste izbjegli kontaminaciju RNazom.

2. Proizvodi obrnute transkripcije mogu se nakratko pohraniti na -20 stupnjeva. Ako je potrebno dugotrajno skladištenje, preporučuje se skladištenje na -80 stupnjeva nakon pakiranja i izbjegavanje ponovljenih ciklusa smrzavanja i odmrzavanja.

3. Ako je predložak eukariotskog podrijetla, preporuča se odabrati Oligo (dT)18 Primer i upariti ga s 3' Poly A repom eukariotske mRNA kako bi se dobio najveći prinos cDNA pune duljine.

4. Za obrnutu transkripciju prokariotske RNA treba koristiti Random Hexamer Primer ili Gene Specific Primer.

5. Random Hexamer Primer ima široku primjenjivost i prikladan je za mRNA, rRNA, tRNA, male RNA i lncRNA predloške.

6. Ako nakon reverzne transkripcije slijedi qPCR test, Oligo (dT)18 Primer i Random Hexamer Primer mogu se miješati kako bi se postigla ista učinkovitost sinteze cDNA u svim regijama mRNA, što pomaže u poboljšanju autentičnosti i ponovljivosti kvantitativnih rezultata.

7. Ako su sljedeći qPCR primeri dizajnirani preko egzona, korak uklanjanja genoma može se izostaviti.

 

Samo za istraživačku upotrebu!

 

 

Popularni tagovi: swescript rt i komplet za sintezu prvog lanca cdna (sa sredstvom za uklanjanje gdna), Kina swescript rt i komplet za sintezu prvog niza cdna (s sredstvom za uklanjanje gdna) proizvođači, dobavljači, tvornica