Komplet za analizu fluorescencije lipidnih kapljica

 

Naziv proizvoda	Mačka. Ne.	spec.
Komplet za analizu fluorescencije lipidnih kapljica	G1905-100T	100 T

 

 

Kapljice lipida su specijalizirane organele za skladištenje lipida u stanicama, koje mogu regulirati skladištenje i hidrolizu neutralnog lipida u stanicama i osigurati dinamičku energetsku ravnotežu stanica. Osim toga, kapljice lipida mogu se kretati duž citoskeleta i komunicirati s drugim organelama, igrajući važnu ulogu u regulaciji prijenosa signala. Abnormalno nakupljanje staničnih lipidnih kapljica događa se u nekoliko vrsta metaboličkih bolesti, kao što su pretilost, masna jetra, kardiovaskularne bolesti i patološka stanja.

Komplet za analizu fluorescentne analize lipidnih kapljica temelji se na BODIPY 493/503, koji je lipofilna fluorescentna sonda sposobna lokalizirati polarne lipide i može se koristiti za kalibraciju neutralnog sadržaja lipida u stanicama i tkivima. Ovaj komplet optimizirao je i otklonio pogreške naš Tim za istraživanje i razvoj, te ima višestruke prednosti kao što su jednostavno korištenje, stabilne performanse i dobra ponovljivost, itd. Što je veći unutarstanični sadržaj lipida, to je jači intenzitet generirane fluorescencije, koja se može detektirati fluorescentnim mikroskopom i protočnim citometrom. Osim toga, ovaj komplet dodatno osigurava oleinsku kiselinu kao induktor sinteze i skladištenja triglicerida, koja se može koristiti za indukciju pozitivne kontrole.

 

 

Brod sa suhim ledom; Čuvati na -20 stupnjeva daleko od svjetlosti 6 mjeseci.

 

 

Broj komponente	komponenta	G1904-100T
G1905-1	Sonda za analizu lipidnih kapljica (2 mM)	100 μL
G1905-2	Pufer za analizu lipidnih kapljica	100 mL
G1905-3	Pozitivni induktor (500 mM)	50 μL
Priručnik		1 kom

 

Napomena: gornja vremena reakcije testirana su za 6-sustav ploča s jažicama.

 

 

Napomena: Uzmimo za primjer 6-stanice prianjajuće na ploču s jažicom, stanice suspenzije potrebno je centrifugirati svaki put kad se promijeni tekućina; Uzorci tkiva izravno se odnose na korake bojenja i označavanja, a ukupna količina korištenih reagensa prilagođava se situaciji; Ako je potrebno, uzorci se mogu popraviti unaprijed, ali izbjegavajte perforaciju uzoraka.

1. Priprema radne otopine za analizu lipidnih kapljica i radne otopine za indukciju lipidnih kapljica:

1.1. Uzmite odgovarajuću količinu sonde za analizu kapljica lipida (2 mM) i pufera za analizu kapljica lipida, temeljito promiješajte u omjeru 1 : 500-2000 i pripremite radnu otopinu za analizu kapljica lipida;

1.2. Uzmite odgovarajuću količinu pozitivnog induktora (500 mM) i upotrijebite medij stanične kulture odgovarajućih ispitnih stanica da ga razrijedite na 400-1000 uM i pripremite radnu otopinu za indukciju kapljica lipida za rezervnu upotrebu (ova koncentracija je referentna raspon i može se prilagoditi na odgovarajući način prema prirodi stanica ili drugim okolnostima).

2. Pozitivna kontrolna skupina te lijekovi i drugi tretmani (6-stanice prianjajuće na ploču s jažicom, na primjer, stanice u suspenziji pri svakoj promjeni tekućine, izvršite centrifugiranje):

2.1. Stanice su prethodno posađene u 6-pločice s jažicama prema potrebi (sa ili bez gusjeničara, ovisno o ispitivanju i opremi);

2.2. Uklonite izvorni medij stanične kulture i dvaput isperite PBS-om ili drugim puferima;

2.2.1. Eksperimentalna skupina: stanice koje se testiraju podvrgavaju se stimulaciji lijekovima ili drugim relevantnim tretmanima, a željeno vrijeme inkubacije postavljate sami;

2.2.2. Pozitivna kontrolna skupina: 1 mL radne otopine za indukciju kapljica lipida doda se u ploču s jažicom, koja se stavi u inkubator za inkubaciju preko noći;

2.3. Na kraju inkubacije prijeđite na korak 3 za označavanje mrljama.

3. Marker za bojenje kapljica lipida:

3.1. Uklonite celulogeni medij i isperite 2-3 puta PBS-om ili drugim puferima;

3.2. Uklonite pufer za ispiranje, dodajte 1 mL radne otopine za analizu kapljica lipida i promiješajte uz lagano mućkanje;

3.3. Inkubirajte 15 min u CO2 inkubatoru zaštićenom od svjetlosti;

3.4. Nakon inkubacije, isprati ga dva puta s PBS-om ili drugim puferima, te se može dodatno obojiti jezgrama i drugim postupcima ili detektirati odgovarajućom opremom u skladu s eksperimentalnim potrebama;

4. Detekcija lipidnih kapljica:

4.1. Uzorak nakon inkubacije i ispiranja u 3.4 analizira se odgovarajućom metodom i instrumentima, označenim da pokazuje zelenu fluorescenciju, EX/EM 493/503 nm, a neki primjeri instrumentalne detekcije navedeni su u nastavku;

4.1.1. Izravno ili s otopinom za brtvljenje protiv gašenja fluorescencije (br. artikla G1401), film se zatvara i zatim stavlja pod fluorescentni mikroskop radi otkrivanja i analize.

4.1.2. Nakon digestije i resuspendiranja triptičnim digestom (stanice za suspenziju se ne koriste), stanice se otkrivaju i analiziraju protočnom citometrijom.

 

 

1. Zbog različitih vrsta i svojstava stanica, koncentracija pozitivnih induktora i sondi te vrijeme inkubacije mogu se prikladno prilagoditi prema potrebama eksperimenta.

2. Uzorci trebaju izbjegavati kontakt s organskim otapalima ili drugim komponentama koje utječu na lipide kako bi se izbjeglo ometanje točnosti analize.

3. Fluorescentne boje podliježu gašenju, a postupak treba zaštititi od svjetlosti.

4. Radi vašeg zdravlja i sigurnosti, molimo nosite laboratorijsku kutu i rukavice tijekom rada.

 

Samo za istraživačku upotrebu!

 

 

Popularni tagovi: kit za ispitivanje fluorescencije kapljica lipida, Kina pribor za ispitivanje fluorescencije kapljica lipida proizvođači, dobavljači, tvornica